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果蔬样品为番茄、黄瓜、韭菜、马铃薯、西瓜、苹果、橙子（唐山市批发市场）。1.2.4回收率测定方法式中：C0为回收质量浓度，g／mL。式中：RSD为相对标准偏差。GB23200.82016《食品安全国家标准水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》中虽能准确地测出蔬菜、水果中氟虫腈的含量，但未提及其代谢物。1.2.6加标回收试验在样品中分别添加氟虫腈及其代谢物，添加浓度分别为0.01和0.02mg／kg，每个添加水平重复6次。

混合标准工作溶液：用甲醇逐级稀释成质量浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.08，0.12，0.16和0.32g／mL的混合标准溶液，于4℃冰箱内保存。1.1.2试剂与材料标准品氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈。1.2.5加样回收率的试验精密称取含量已知的喘舒片样品（批号：20191101）粉末6份，加入相当于样品含量100%的对照品溶液，按1.2.2项方法制备供试品溶液，分别进样，记录峰面积，计算加样回收率。

取喘舒片样品（批号：20191101），按1.2.2项方法平行制备6份供试品溶液，分别进样测定，计算得盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的RSD分别为2.23%、1.02%、1.27%、1.74%、2.04%、1.48%、1.82%、2.64%，表明方法的重复性良好。方法采用AgilentTC-C18（2）色谱柱（250mm4.6mm，5m），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长分别为245、278、254nm，流速1.0mLmin-1，柱温35℃。各待测成分色谱峰均能达到基线分离，分离度大于1.5，各组分吸收峰的理论板数均不低于3.0103，阴性样品溶液图谱显示其他成分对9种待测成分无干扰。诸药相和，达到清肺热、化痰定喘的功效。

盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的平均加样回收率分别为99.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD分别为1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%。目的采用HPLC波长切换法同时测定喘舒片中盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。

1.2.2溶液的制备精密称取盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇溶解并定容，制得分别含18.28gmL-1盐酸克仑特罗、1.275mgmL-1黄芩苷、0.2214mgmL-1黄芩素、121.4gmL-1汉黄芩素、24.1gmL-1芦荟大黄素、24.08gmL-1大黄酸、24.158gmL-1大黄素、57.88gmL-1大黄酚、35.80gmL-1大黄素甲醚的混合对照品溶液。升华硫、盐酸克伦特罗能止咳、化痰、定喘，用于防治支气管哮喘、慢性喘息性支气管炎、肺气肿等疾病所致的支气管痉挛。曾考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲醇-磷酸-水、乙腈-磷酸-水等流动相系统，最终选择文中流动相系统，实现了9种待测成分和相邻杂质峰的良好分离。黄芩提取物清热燥湿，尤善清上焦热邪，具抑菌、抗炎、抗变态反应、缓解哮喘、解痉挛等作用。

取同一供试品溶液，在常温下，分别于制备后0、2、4、6、8、12、24h后进样分析，计算得盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.80%、1.49%、1.32%、1.71%、2.33%、1.79%、1.72%、2.03%、2.38%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。分别进样测定，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程，线性范围及相关系数（表1）。9种成份在样品中的含量分别为每片8.6510-3～0.01104、49.460～57.464、0.864～1.883、0.215～0.388、0.0371～0.0866、0.0399～0.131、0.0464～0.0916、0.143～0.327、0.154～0.267mg。结果表明：以甲醇-盐酸（100∶1）为提取溶剂时，液相色谱图谱杂质峰增多，黄芩素色谱峰与相邻杂质峰无法实现基线分离。

1实验部分1.1仪器与试药1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦）。盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等对照品（100072-201503、110715-201619、111595-200503、111514-200403、110795-201007、0757-200206、110756-201512、110796-201520、110758-201013，含量分别为90.5%、93.5%、99.8%、99.8%、98.0%、98.8%、98.7%、99.2%、99.8%）。

因此，文中采用245、278、254nm作为测定波长，可实现对供试品溶液中9种目标物的良好分离，满足方法学考察的要求。按喘舒片的处方和制备方法，分别制备缺盐酸克仑特罗、缺黄芩提取物、缺大黄粉的阴性样品，同法分别制成各阴性样品溶液。

1.2.6样品的含量测定取6批喘舒片样品，分别按1.2.2项方法制备供试品溶液，按1.2.1项色谱条件测定，采用外标法计算每片样品中各待测组分的含量（表2）。以甲醇为提取溶剂，超声提取30min，提取效果最好，色谱图杂质峰少，基线稳定，9个目标物与相邻峰均能完全分离，分离度大于1.5。参考处方中部分待测组分的理论含量，并结合样品分析图谱中各待测组分的相对含量，经反复实验摸索，最终文中对照溶液的浓度，在实验浓度范围内，9种待测组分的含量均在拟合回归方程的线性范围内。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：大黄酚，黄芩苷，液相色谱。山东百维药业有限公司，批号：20190412）。1.2方法与结果1.2.1色谱条件与系统适用性的试验采用AgilentTC-C18（2）色谱柱（250mm4.6mm，5m），流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～5min、50%A，5～35min、50%～70%A，35～55min、70%～75%A，55～60min、75%～50%A），流速1.0mLmin-1，柱温35℃，进样量10L，检测波长分别为245nm（盐酸克仑特罗）、278nm（黄芩苷、黄芩素）、254nm（芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）。

曾考察了不同浓度的甲醇溶液及甲醇-盐酸（100∶1）作为溶剂的超声提取效果。声明：本文所用图片、文字来源《华西药学杂志》，版权归原作者所有。

喘舒片（河南华峰制药有限公司，批号分别为：20180104、20181101、20190802、20191001、20191101。平均加样回收率分别为98.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD分别为1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%。

1.2.4精密度、重复性与稳定性的试验精密吸取1.2.2项下混合对照品溶液，连续进样6次，计算得盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.21%、0.74%、0.48%、1.72%、0.89%、1.51%、0.60%、1.43%、1.83%，表明仪器的精密度良好。文献报道中有关喘舒片指标性成分的含量测定多见于单一药味成分的研究，课题组前期曾采用HPLC法同时测定了喘舒片中5种蒽醌类成分的含量。

中西药复方制剂的疗效是由多组分共同作用的结果，单一组分的定量分析难以实现对制剂整体质量控制的目的，为全面有效地控制喘舒片的质量，现采用HPLC波长切换法同时测定喘舒片中盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等9种成分的含量，为全面评价喘舒片的整体质量提供了依据。结果盐酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性范围分别为0.92～18.28（r=0.9989）、63.75～1275（r=0.9999）、11.07～221.4（r=0.9996）、6.07～121.40（r=0.9995）、1.20～24.10（r=0.9998）、1.20～24.08（r=0.9994）、2.08～24.16（r=0.9999）、2.89～57.88（r=0.9993）、1.79～35.80（r=0.9997）gmL-1。2讨论在喘舒片处方中，盐酸克伦特罗属微量成分（标示量为每片10g），黄芩提取物（以黄芩苷计）的理论含量为每片60mg，两种组分含量的巨大差异让同时测定两者的含量比较困难。结论所用方法简便、准确、重复性好，灵敏度高，可用于喘舒片的质量控制。

采用HPLC-DAD在190～400nm扫描，结果显示：盐酸克仑特罗的最大吸收波长为245nm，黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在220、278、318nm均有较大吸收，大黄粉中蒽醌类成分在254～265nm有较强的紫外吸收。取喘舒片供试品适量，除去包衣，研细，取1.0g细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL甲醇，密塞，称定重量，超声提取30min，取出，冷却至室温，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.2.3线性关系的考察精密吸取1.2.2项下混合对照品溶液0.5、1、2、5、8、10mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释并定容，制得系列浓度对照溶液。黄芩苷色谱峰消失，黄芩苷为一元弱酸化合物，与酸碱作用具有多位反应点，推测可能在酸性环境中发生了酸催化的水解反应。

国内有河南华峰制药有限公司和山东百维药业有限公司两家喘舒片生产企业，前者采用HPLC法分别对盐酸克仑特罗和黄芩苷进行单组分含量测定，后者采用UV法控制盐酸克仑特罗的含量分别精密称取0.5mg大黄素、0.7mg齐墩果酸对照品，置小烧杯中，加甲醇溶解，超声30min，使彻底溶解，冷却至室温，转入10mL量瓶中，加甲醇定容，制得大黄素、齐墩果酸终浓度分别为50、70gmL-1的混合对照品溶液。

目的采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸的含量。结果大黄素和齐墩果酸的峰面积与进样量间的线性关系良好，r均超过0.9993，RSD不超过2%，平均回收率均大于95%。3批样品中，每粒分别含大黄素1.18、1.18、1.19mg、齐墩果酸1.63、1.63、1.64mg。参考课题组对于其他处方中成分的含量测定，现采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸两种有效成分的方法，有利于和胃降逆胶囊的质量控制。

方法采用AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（250mm4.6mm，5m），流动相为甲醇-0.1molL-1磷酸溶液（85∶15），梯度洗脱，流速1mLmin-1，检测波长210nm。2讨论朱砂七是和胃降逆胶囊中的主药，其主要有效成分是大黄素，而老龙皮和楤木是辅药，其主要有效成分都含有齐墩果酸，因此，选择大黄素和齐墩果酸作为含量测定的指标。

蒲公英则具有抗肿瘤、抗氧化的功效。大黄素是一种蒽醌衍生物，而齐墩果酸属于三萜皂苷，二者皆可溶解于甲醇中，都具有酸性，酸化滤液残渣后酸性物质以游离形式存在，再用三氯甲烷回流，大黄素和齐墩果酸会进入氯仿层，分取有机层，重复多次操作，则可充分提取样品中的大黄素和齐墩果酸。

声明：本文所用图片、文字来源《华西药学杂志》，版权归原作者所有。分别对供试品溶液制备过程中的水解时间和提取次数进行了验证，以峰面积与取样量比值为评价指标，比值越大，说明水解越完全，提取越彻底。